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DyLigh™系列熒光標記是一種近年來被廣泛應用的新型熒光染料,由于具有很好的光譜寬度、更強的熒光強度,更高的光學耐受性(抗淬滅性)、對pH不敏感、分子較小而滲透性更好的優勢,越來越受到科研客戶的喜愛。DyLight™種類齊全,如Dylight 405是藍色熒光,替代Alexa 405;DyLight 594是綠色熒光,可完全替代FITC/Cy2/Alexa 488;完全替代Cy3/Rhodamin/Alexa 546/Alexa 555的Dylight 549;替代Texas Red/Alexa 594的Dylight 594;Dylight 633和Dylight 649(可替代Cy5/Alexa 647)則是更強的紅色熒光;另外,Dylight還有適配Odyssey系統的近紅外和遠紅外二抗Dylight 680和DyLight 800。
圖 1:HEp-2細胞使用ANA一抗(BIO-RAD),并比較使用不同發色團的二抗標記。熒光顯微鏡下觀察ProLong Gold (Invitrogen)封片的細胞。Nikon LABOPHOTNikon 熒光顯微鏡連接D-70 DSLR 攝像機,100×曝光拍攝的圖片。圖中Alexa 594和DyLight 594標記的細胞1秒曝光所拍,Texas Red標記的細胞2秒曝光所拍。其它封片劑處理的細胞獲得類似的結果。 |
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圖2、以時間為橫坐標,初始熒光強度的百分比為縱坐標繪制的熒光強度圖表,HEp-2細胞以ANA(Bio-Rad)和各種紅色熒光標記的山羊抗人IgG(H+L)的二抗標記。細胞分別用ProLong Gold(左)、Vectashield(中)、含N-propyl gallate的 PBS-90%甘油封片(右)。由上圖所示,ProLong Gold 封片的細胞經DyLight 594標記顯色,耐光性強于Texas Red,與Alexa 594相當。Vectashield封片的細胞用DyLight 594和Alexa 594標記,耐光性弱于Texas Red。然而含N-propyl gallate的PBS-90%甘油封片的細胞DyLight 594標記抗體,耐光性強于其他標記抗體。 |
DyLight 594標記的抗體熒光亮度明顯強于Alexa 594標記抗體。相比較Texas Red而言,不僅更亮,而且具有更好的水溶性。與DyLight 549、Cy3或TRITC標記物相比,它與綠色標記染料表現出更大的色差;就其光學穩定性,DyLight 594在不含有抗淬滅劑的條件下,遠較Texas Red穩定,與Alexa594相當;在含有某些抗淬滅劑的情況下,DyLight 594同樣表現優異??傊?,在可見光譜的深紅色區域內,DyLight 594標記二抗是所有免疫熒光實驗中最好的選擇。另外,DyLight熒光標記的二抗比傳統的FITC/Cy2以及Alexa 488具有更高的性價比。
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品名 | 品牌 | 貨號 | 規格 |
DyLight 594 AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) | EarthOx | E032410 | 100μl/500μl |
DyLight 594 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) | EarthOx | E032420 | 100μl/500μl |
DyLight 594 AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG(H+L) | EarthOx | E032430 | 100μl/500μl |
DyLight 594 AffiniPure Goat Anti-Rat IgG(H+L) | EarthOx | E032440 | 100μl/500μl |
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