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魯米諾由于具有量子產率高、易合成、水溶性好等優點,已成為應用zui廣泛的化學發光試劑之一。它的發展歷程就和人的艱苦歷程一樣,由開始的認識不多,到現在的發光發熱,只能用一句話總結:是金子總會發光。往后可能會有更多我們不知道的用途來造福我們的生活。我們只要更多的了解它才能早日發掘它的無限潛力。
在無機物分析中的應用
利用無機離子能增強或抑制魯米諾體系的化學發光,可對這些金屬離子進行測定,值得指出的是,某些金屬離子與配位劑結合后,具有比金屬離子更高的催化活性。如利用魯米諾-H2O2-鄰菲啰啉銀體系,測定銀離子的檢出限達到2.7×10-g/L3。
使用增敏劑可提高檢測的靈敏度。三苯甲烷類衍生物對魯米諾發光體系的增敏作用,發現考馬斯亮藍G250對luminol-H2O2-Cu2+體系有好的增敏效果,并采用反相流動注射技術,建立了測定Cu2+的新方法,檢出限為1.5μg/mL。利用表面活性劑的局部濃集效應實現膠束增敏,在發光分析中的應用日益增多。如利用反相膠束體系FIA法測V4+,檢出限為0.05ng/mL;采用魯米諾-釩鉬雜多酸體系測水樣中的磷,使用表面活性劑增敏,可使檢出限降低5倍,達到0.02μg/L。
在有機物分析中的應用
利用有機物對魯米諾發光體系的促進、抑制作用,可實現對有機物的分析測定。使用N-溴代丁二酰亞胺(NBS)、N-氯代丁二酰亞胺(NCS)為氧化劑,采用FIA技術不僅測定了自來水和井水中的NBS、NCS,還基于陽離子表面活性劑抑制魯米諾-NBS(NCS)化學發光的性質,建立了測定陽離子表面活性劑的新方法。
一般抗氧化劑會抑制魯米諾的化學發光。采用FIA技術,考察了不同抗氧化劑對魯米諾-活性氧(超氧陰離子O2-、羥基自由基OH-、過氧亞硝酸鹽、H2O2、CIO-)發光反應的抑制作用。基于抗氧化劑對luminol-H2O2體系的抑制,結合HPEC技術,測定了植物萃取液中的自由基清除劑,該方法的改進使靈敏度提高了4倍。潛在的抗氧化劑半胱氨酸對luminol-H2O2-Co2+體系具有促進作用,而谷胱甘肽具有抑制作用,但是對魯米諾-過亞硝酸鹽體系,二者均有增敏作用,基于這些性質建立了測定半胱氨酸和谷胱甘肽的新方法。
在免疫分析中的應用
化學發光分析的另一個主要用途是免疫分析。將發光試劑或增敏劑分子標記到抗原或抗體上,進行酶、抗原或抗體測定的化學發光免疫分析法,具有安全無污染、標記物穩定、快速、靈敏度高等優點。
具有較高發光效率的自由態魯米諾常被用于酶標記的免疫分析中,利用酶標記增敏魯米諾的發光反應已用于血管內皮生長因子、睪丸甾酮等測定。將半抗原用二茂鐵標記后,利用其對luminol-H2O2-二茂鐵電致化學發光反應的抑制作用,測定了半抗原等小分子,將HRP標記到與脂質體結合的抗體上,發現其催化魯米諾發光的活性比HRP直接標記到抗體上高125倍。
魯米諾化學發光分析在各個領域都得到了廣泛應用,新的方法、新的技術不斷涌現,特別是與FIA、HPLC等技術的聯咒,克服了發光分析選擇性差的缺點,使分析更加靈徽、準確。因魯米諸性能穩定、價格低廉,實際應用研究分析將會有更為廣闊的應用前景。