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1. 基本性質
吖啶類化合物應用于化學發光檢測具有以下優點:
① 背景發光低,信噪比高;
② 發光反應干擾因素少;
③ 光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大;
④ 易于與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少;
⑤ 標記物穩定(在2-8℃下可保存數月之久),它們在水中溶解性好,穩定且不易水解。
吖啶類化合物化學發光不需要催化劑,在有H2O2 的稀堿性溶液中即能發光。化合物的發光為閃光型,加入發光啟動劑后一般0.5s 左右發射光強度達到zui大,半衰期為1s左右。
吖啶類化合物應用于化學發光免疫分析(CLIA)。即用吖啶鹽標記抗體或抗原,用HNO3+ H2O2 和NaOH 作發光啟動試劑。有些在發光啟動試劑中加入Triton X-100,CTAC,Tween-20等表面活性劑以增強發光。
吖啶類化合物常用于環境分析、免疫分析、酶活性分析和標記寡核苷酸片段等,在臨床上用于測定細菌、病毒或其它疾病標志物。
2. 吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS
吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS是一種理想的化學發光免疫分析標記物質,具有良好的發光性能。與目前廣泛使用的吖啶酯AE-NHS相比,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS與抗體(Ab)偶聯物的發光強度更高,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS為1.03′107cps/ng,而AE-NHS為1.0′105cps/ng Ab,兩者的發光動力學性質很相似,都為閃光型發光且都 是在0.4s時達到zui高,但DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS的熱穩定性較AE-NHS顯著提高,AE-NHS只在酸性溶液中穩定,當pH>6.3后易水解,而DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS則不然,如在室溫下,在pH為7.0的PB緩沖液中很穩定,16天后,發光活性只降低3.6%。它們與蛋白偶聯物的發光熱穩定性情況與此相似。
吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS易于標記生物分子且標記后化合物的發光活性及生物活性穩定,以所合成的為發光標記物應用于化學發光免疫分析具有很高的靈敏度和其它理想的方法學指標,如對TSH的最低檢測限達0.007 mIμ/L。因此,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS對于研究化學發光分析以及化學發光免疫分析均具有很好的應用價值。
3. 吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS是一種非常有效的化學發光免疫分析標記物質,它具有空間位阻大,水解穩定性好,熱穩定性和信噪比高等性質。它的光量子產率也優于吖啶酯AE-NHS。應用于直接化學發光分析及化學發光免疫分析等具有許多優點。
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS化學發光不需要催化劑,在有H2O2的稀堿性溶液中即能發光,具有許多優越性,特別是無須一個催化過程,也不需要增強劑,從而降低了背景發光,提高了信噪比,干擾作用少。該類化合物作為化學發光免疫分析的發光標記物,還具有其它方面的優點,如光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大,易于與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少、標記物穩定,在2-8℃下可保存半年以上。
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS的穩定性較吖啶酯類如AE-NHS高,其原因是由于C-N鍵與C-O鍵的鍵級不同,C-N鍵大于C-O鍵。吖啶酰胺類化合物抵抗水解的能力也強于吖啶酯類化合物。