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化學發光免疫檢測中,我們需要用吖啶酯先標記上抗體蛋白,才能在免疫反應后對待測物進行檢測,因此如何標記抗體就非常的關鍵了,吖啶酯類化合物已被廣泛證明為非常有用的化學發光標記物,其穩定性、標記特異性和檢測靈敏度都超越放射性同位素。
吖啶酯發光標記原理:
在堿性條件下,NHS 作為離去基團被取代,蛋白質與吖啶酯形成穩定的酰胺鍵。反應完成后,多余的吖啶鹽通過脫鹽柱除去。在堿性過氧化氫存在下,吖啶標記的蛋白不需要酶催化就可自行發光。
激發液的加入 導致反應體系立即釋放約 430 nm 的光子,通過使用標準光度計(luminometer)計數光子數量就可檢測蛋白質的濃度。因為此發光過程是十分短暫(整個過程在 2 秒鐘內完成),樣品必須直接放在光度計內部光 子探測器前面。蛋白質、多肽、抗體、核酸都可以用吖啶酯標記。
吖啶酯發光標記注意事項
吖啶酯有多種類型,常見的各種吖啶酯、吖啶磺酰胺、吖啶磺酸鹽等等都屬于吖啶酯類化合物。需要注意的是,溶解吖啶琥珀酰亞胺酯時,使用的 DMF 必須嚴格無水,防止吖啶酯水解.不使用時,干燥密封-20℃保存。
如果是不含-NHS 的吖啶羧酸需要加入縮合劑 EDCI 等,才能與含胺基的蛋白發生偶聯反應。吖啶酰肼含有游離氨基,所以更加適用直接偶聯含有醛基的多糖,核酸或者蛋白質等。
吖啶酯發光優勢
1.針對傳統吖啶酯,在其結構上進行了修飾,增大了位阻,增強了抗水解性,如在室溫下,在 pH 為 7.0 的 PB 緩沖液中很穩定。
2.光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大,易與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少。
3.發光反應干擾因素少,標記物穩定( 在2 - 8 ℃下可保存數月之久)
德晟科技研發生產的吖啶酯屬于自主研發生產,對吖啶酯的研究開發投入了大量精力,所以在質量上的把控更加的嚴格。目前公司產品已銷往全球一百多個國家,99%以上客戶都收到好評復購,產品質量優,價格有優惠,有意向了解可以來電咨詢,德晟歡迎您的來電。