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ISET@方法的原理基于一項事實,血細胞是人體中最小的細胞。通過獨創的專利過濾工藝,ISET@可以分離CTC,因為CTC 大于其它血細胞(根據細胞病理學診斷準則),與表達出的抗原無關。分離出的CTC 完好無損。
獨創
從血液中無偏差地、快速高效地分離出完好無損的CTC,適用于所有的癌癥類型。該系統與抗體(EpCAM、細胞角蛋白)無關,可以識別所有的CTC 類型,避免錯誤的陽性和陰性結果。
靈敏度極高
全血過濾和無損CTC 分離,靈敏度非常高,達到1 毫升血液1個CTC,也就是說,在95%以上的情況下,1 個CTC 與大約1000萬個白細胞和50 億個紅細胞混合在一起。
高質量
高質量的血液過濾,不需要其它的步驟。其它血液過濾方法無法比擬。采用30 項專利參數,這些參數對于工作性能來說十分重要。經過了嚴格的質量控制測試 。
富集能力
富集能力極高,與CTC/CTM 一起提取出的非腫瘤細胞數量非常少。分離上皮和間質CTC/CTM,精確統計每毫升血液中的數量。提取固定和非固定(鮮活)細胞,靈敏度非常高。
科學界認可
受到眾多獨立研究團體的認可,發表在30 多家研究刊物上。經過驗證,是唯一與細胞病理學診斷法相容的CTC 鑒定產品。
CTC保存方便
CTC以傳統的載玻片方式保存。分離后,CTC可以在ISET@過濾件上保存至少7年,以便建立CTC 和CTM 生物樣本庫。
方便可靠
對于所有類型的血液樣品均非常安全和高效。根據血液的過濾阻力(由于血液特性存在差異,在臨床上會有所變化),可以調整負壓,同時不會改變細胞的形態。
細胞病理學診斷
采用ISET@技術分離出的CTC/CTM 完好無損,結構沒有改變。病理學家可以判斷是否存在CTC/CTM,把它們與其它稀少細胞區分開, 并鑒定CTC/CTM 的性質。
應用靈活
可以同時處理不同的血液體積(從10 微升到10 毫升)或不同的樣品。適用于多組重復檢測( 對同一份樣品進行多重分析)。適用于所有類型的癌癥(慢性淋巴細胞白血病除外)。
免疫分子學鑒定
通過免疫學、DNA 和RNA 分子學分析,可以全面鑒定由ISET@系統分離出的CTC(原發器官、侵入性、DNA 變異、RNA 變異、表觀遺傳改變)。
ISET方法
ISET@方法的成功來自于Rarecells@裝置、緩沖劑和模塊的使用。這些產品一起使用,確保了高效的血液過濾,同時不會影響細胞形態。使用緩沖劑以1:10 的比例稀釋血液,使血液適合過濾。在輕柔攪拌條件下培養10 分鐘后,把血液轉移到Rarecells@模塊中。Rarecells@模塊含有過濾件,位于Rarecells@裝置上。Rarecells@裝置在3 分鐘之內,把CTC/CTM 富集在膜片上。必須在采集當天對血液進行處理。ISET@與所有常用的腫瘤細胞鑒定方法相容,包括:細胞病理學和免疫染色法、FISH 法、分子學分析法等。Rarecells@系統是一種開放的方法,可以與不同的“工作流程”結合,用于不同的應用領域。
循環腫瘤細胞檢測儀、循環腫瘤細胞分析系統、循環腫瘤細胞分析儀、CTC腫瘤細胞分析儀、CTC捕獲儀,CTC細胞捕獲儀、循環上皮細胞檢測儀,上皮細胞檢測儀,稀有細胞捕獲儀、循環腫瘤細胞捕獲儀
ISET循環腫瘤細胞捕獲儀臨床診斷特異性
對于由ISET@分離出的細胞,其細胞病理學分析具有診斷特異性。一個由10 位病理學家組成的團隊已經驗證了這一點。他們采用盲法分析了經過ISET@處理的770 份血液樣品,其中569 份樣品來自患有不同類型癌癥(處于不同階段)的患者,201份樣品來自健康受試者(Hofman等,美國臨床病理學雜志,2011年)。該研究證明,目前用于脫落細胞病理學以及細針活檢和PAP 檢測的標準細胞病理學準則(細胞尺寸、核質比例、核輪廓和染色質不規則性等),也適用于診斷采用ISET@從血液中提取的CTC。該研究還確認,如果存在甲狀腺腺瘤和甲狀旁腺腺瘤,則細胞病理學分析不具有診斷性,這符合細胞病理學領域的現有知識。
采用免疫標記法可以進一步研究由ISET@分離出的CTC,把它們與其它“稀少細胞”(內皮細胞、巨核細胞等)區分開。
采用ISET@技術分離出的循環腫瘤細胞,經過細胞病理學診斷后,被稱為CCC(循環癌細胞)。
Rarecells@裝置
高效過濾各種類型的血液樣品和其它體液
Rarecells@緩沖劑
Rarecells@緩沖劑用于血液稀釋,可以溶解紅血球,同時不損傷CTC/CTM。
緩沖劑在提供時呈粉末狀,可以直接稀釋和混合。
在使用之前,把甲醛添加到緩沖劑中,以固定大細胞的細胞骨架。
Rare cells@模塊
Rarecells@模塊是一次性使用耗材,可以插入Rarecells裝置中。該模塊用于分配10 毫升血液,采用Rarecells@緩沖劑以1:10的比例稀釋(因此稀釋血液的體積為100毫升),用于標準用途。通過10 個圓形的過濾區域(圓點)過濾稀釋血液。過濾后,每個圓點中含有相當于過濾之前1 毫升血液中的大細胞。
總體特性
樣品類型:血液和所有其它類型的體液,骨髓除外。
物種:人、小鼠、大鼠。
可過濾的血液體積:從10 微升到10 毫升。
固定細胞和鮮活細胞分離:兩種均可,方案和緩沖劑不同。
CTM分離:可以。
癌癥類型,帶已發表的數據:肝癌、乳腺癌、前列腺癌、結腸直腸癌、腎癌、頭頸部癌、胰腺癌、肺癌(非小細胞和小細胞肺癌)、惡性腫瘤、皮膚黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤
下游分析可能性:細胞病理學染色(MGG、HE、巴氏染色)、免疫染色(細胞角蛋白、波形蛋白等)、FISH(EML -ALK 、HER2 等)、分子學分析(KRAS、EGFR、BRAF、NGS 等)
處理時間:每份樣品大約15 分鐘。紅血球溶解:10 分鐘,過濾:2-3 分鐘,沖洗和從模塊中取出過濾件:1-2 分鐘
從抽血到處理的時間:應盡可能快地進行處理,因為CTC 在血液中不穩定。血液不能在未經處理的情況下放置過夜。
分析性能
Rarecell@系統本身不具有診斷能力。該系統的作用是分離稀少細胞,以便通過后續分析進行高效的診斷
準確性-相對于基準或標準的測量正確性
c采用多種細胞系對系統的體外檢測準確性進行了評估,并發表了結果。這些細胞系包括:HepG2、LNCaP、MCF-7、H1299(Vona等,2000,美國病理學雜志;Krebs 等,2011,胸部腫瘤學雜志)、A549、HeLa、H228、A375、PC3(未發表的數據)
精確度-運行周期之內 不同的運行、批次、儀表、日期、地點之間
不同的獨立的團隊報道了ISET@系統的體外檢測的可重復性和可復制性。(Vona等,2000 ,美國病理學雜志;Krebs 等,2011,胸部腫瘤學雜志)
靈敏性-可以檢測出的最小數量
在95%以上的情況下,ISET@系統可以檢測出1 毫升血液中的單個腫瘤細胞(檢測限值:1 毫升血液中1 個腫瘤細胞)。(Vona等,2000,美國病理學雜志;Krebs等,2011,胸部腫瘤學雜志)
特異性-檢測特定要素并避免交叉檢測的能力
ISET@從血液中提取腫瘤細胞,并保持細胞完好無損,以便進行后續的診斷性細胞病理學分析或其它免疫分子學分析。這兩種分析均具有診斷特異性。