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[標(biāo)本的采集與保存]
1、 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4oC過(guò)夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、 組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱(chēng)重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL預(yù)冷PBS進(jìn)行充分研磨,該過(guò)程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過(guò)程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘,留取上清即可檢測(cè)。
4、 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意:
1、 以上標(biāo)本均需密封保存,4oC保存應(yīng)小于1周,-20oC不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月,-80oC不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。
2、 標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
3、 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。