為實驗選擇合適的生物緩沖液(Tris,Mops,Hepes,Pipes等)可能很棘手,緩沖區選擇過程就像玩“猜猜誰”。像游戲一樣,一般來說,可以從非常廣泛的緩沖區列表開始,然后慢慢地提出問題和研究答案以縮小選擇范圍。
在下文將給大家提供一些選擇生物緩沖液的注意事項。
1. 確定實驗的pH:
在許多實驗中,需要更改條件以使蛋白質在溶液中保持完美狀態。假設在pH 7.4的條件下進行了模擬生物條件的實驗,但是蛋白質在此pH值下不穩定,因此需要優化這種情況。要注意的是,目標pH值通常離蛋白質等電點(pI)大約一個pH單位(有時稍遠)。pI是給定的分子或蛋白質不帶凈電荷的pH值。當蛋白質達到其pI時,它的溶解度就不那么高。
2. 考慮不必要的緩沖區交互:
決定使用哪個緩沖區的另一個重要步驟是確定是否存在負緩沖區交互。舉個例子,如果正在使用一種酶,那么有機緩沖液可能會影響酶功能的好壞。
3. 實驗時需要考慮到的一些問題:
就像游戲一樣,可以提出一些問題,以確保獲得正確的緩沖。舉個例子,1.溶液中是否存在可能于緩沖液絡合的金屬?2.目標蛋白是一種酶嗎?它屬于哪一類?3.配體結合,蛋白質穩定性或電泳的離子強度要求是什么?像這樣的一些問題根據實驗時的具體情況來提問并思考,將進一步幫助找到合適的生物緩沖液(Tris,Mops,Hepes等)
4. 考慮下游實驗時會有什么影響:
研究人員經常遇到的一個絆腳石是,他們將從緩沖區開始,并發現它不適用于下游應用程序。舉個例子,已知Tris會對Bradford assay產生負面影響。其他生物緩沖液會對質譜產生負面影響。不幸的是,在執行第1步和第2步之后,可能已經縮小了緩沖區的范圍,只是發現它在將來可能無法很好地工作。在這種情況下,必須進行一些研究以找到合適的替代方法。但是,既然已經縮小了所需的特征,那么進行這項研究就會容易一些。
5. 尋找合適的緩沖區:
當知道要使用什么緩沖區時,就應該區采購緩沖區了。對于大多數研究人員而言,底價和純度基本上是在哪里購買緩沖液的重要標準。當然,也可以去找大品牌的公司,那么將會獲得合適的產品。但是,其價格也一定不會便宜。取而代之,湖北新德晟材料有限公司具有不斷增長的高質量緩沖液產品,而且價格將會是您心里的合適價位。
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