20*SYBR Green I
定量PCR專用
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SYBR Green I與dsDNA 結合熒光信號可增強800—1000倍。在PCR反應體系中,加入過量SYBR Green I熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,熒光信號增強,而不摻入鏈中的SYBR Green I染料分子熒光不變,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測定。
使用濃度對熒光PCR結果的影響
SYBR Green I熒光定量PCR的試驗成功有很多因素,但是SYBR Green I的使用濃度是非常關鍵的因素,如果SYBR Green I的濃度過低會使熒光信號的變化降低。這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出;而在高濃度時,將會抑制PCR反應。降低PCR反應效率。所以一般在使用SYBR Green I時應根據實際情況優化使用濃度。
我們提供的為20×的濃縮液,使用時可稀釋20—100倍,即使反應的終濃度為1×到0.2×之間。
鎂離子濃度的影響
提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對PCR反應的抑制作用。我們建議在用SYBR Green I進行熒光PCR反應時,鎂離子濃度要比無SYBR Green I 的普通 PCR 反應要高出 0.5 到3mM。
20*SYBR Green I 定量PCR專用
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