樣品制備
我們可以接受的樣品形式為
1、PVDF膜結合的樣品(請提供整膜)
2、HPLC純化后的凍干粉樣品。
以下建議會有助于您準備您的蛋白測序的樣品,這些意見適用于幾乎所有的純化方法。
1、樣品不能含有下列會干擾蛋白測序的物質:
去污劑(Detergents)/ 鹽分(Salts)/ 非揮發性緩沖液(Non volatile buffers)
胺(Amines)/ 氨基酸(Amino acids)
2、避免因吸附而導致的樣品丟失:
當分離純化小量的蛋白時,樣品的回收率往往較低,很大的一個原因是由于表面吸附,下面一些小竅門有助于解決這個問題:避免透析 / 不要讓樣品干透,用盡可能小的管 / 特殊的疏水性蛋白,最多可加SDS 至0.05 %以減少吸附損失。
3、在SDS-PAGE 電泳純化蛋白時,注意下面一些事項能更好的保證樣品制備的成功率:
1) 每三至四周配置一次丙烯酰胺儲液,用所能得到的最好的試劑和水;
2) 用盡可能薄的膠來分離,最好聚合過夜使膠聚合充分,上樣之前預電泳數分鐘;
3) 充分上樣,使每條帶能有1-5 ug的目的蛋白
樣品信息
送達我們的樣品請注明以下信息:
1、 量。 我們要求提供至少20pmol, 希望提供50-100pmol,以便我們有足夠的量重復實驗。但經驗告訴我們,客戶提供給我們的樣品經常是被高估了樣品的量,我們推薦將已定量的標準蛋白做一系列稀釋,同樣品一起分道電泳,這樣有助于準確估計樣品的數量級。
2、 純度。 無論液相樣品或轉膜樣品,最少得達到75%的純度(基于摩爾數),重要的一點,所有的樣品不能含有任何非揮發性的緩沖液、避免氨基酸污染(Tris- glycine緩沖體系不合適),絕對不能含有鹽分或去污劑。推薦您拿給我們的樣品的最后一步用反向HPLC制備。
3、 其他信息。期望測得的氨基酸個數 / 分子量 / 組織來源 / 制備方法等
價格
開機費:¥1600元,含前五個氨基酸測序的費用;此部分款項需預付,無結果不再退還。 每循環:¥248元