測序樣品相關說明
樣品類型
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注意事項
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細菌
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1.通用載體或自己構建的載體,都請注明載體名稱、抗生素類型以及具體測序引物。
2.我們提供Amp,Kan,Tet及Chl四種抗生素;特殊抗性、特殊培養條件的樣品,請您提供已經培養好的5ml新鮮菌液或沉淀好的菌體。
3.如果是病毒(包括噬菌體)DNA,低拷貝質粒以及BAC DNA,請您純化好模板直接用于測序。
4.建議您提供穿刺菌。如果是菌液則必須是新鮮的;加甘油后冷凍保存的菌株請您復蘇后再提供。
5.樣品太少會導致培養時間過長甚至出現培養細菌失敗,以至延誤您的實驗,所以提供的菌液至少200ul以上。
6.務必注明是否有特殊結構:GC rich;GC cluster、Poly(A)、Poly(T)、重復序列及引物同源序列等。
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質粒
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1.為確保測序的成功率和質量,建議您盡量提供菌種測序。
2.因特殊原因只能提供質粒模板測序時,必須保證質粒是高純度的,而且須溶解在滅菌的去離子水中而不是TE中。濃度大于100ng/ul,體積10ul以上,注明抽提方法。
3.如果是病毒(包括噬菌體)DNA,低拷貝質粒以及BAC DNA,請純化好模板直接用于測序。
4.插入片段有特殊結構時必須注明,特別是含有通用引物的同源序列。
5. 務必注明是否有特殊結構:GC rich;GC cluster、Poly(A)、Poly(T)、重復序列及引物同源序列等。
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PCR產物
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1.原則上收取高質量的PCR原液, 片段大小為200~1500bp。
2.取3ul原液電泳檢測,為明亮單一條帶。
3.提供未純化產物測序,PCR原液不少于50ul;須注明產物的體積、片段大小、濃度,是否經過Agarose膠純化。
4.提供已純化的產物測序,體積不少于15ul,PCR產物須溶解在滅菌的去離子水中而不是TE中;注明提供PCR產物的體積、片段大小、濃度,是否經過Agarose膠純化。
5.提供的測序引物,濃度不低于5pmol/ul(5umol/L),要求PAGE純化,體積15ul以上,樣品多將適當增加量。
6. 務必注明是否有特殊結構:GC rich;GC cluster、Poly(A)、Poly(T)、重復序列及引物同源序列等。
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備注
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我們為您提供的免費通用測序引物信息。
2.隨機引物(RAPD)、含簡并堿基或長度小于15的引物不適合用于測序。
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三、測序報告說明
1.提供報告的形式:
結果出來的第一時間我們將用email 將序列發到您的信箱,隨后送出測序報告。測序報告包括彩色圖譜一份和相應序列文本。
對于15個以下的測序,在提供書面報告的同時會提供一張軟盤,里面包括Chromes軟件、序列和圖譜文件。
大量測序的報告將采用光盤的形式提供結果,并附上一些最常用的序列分析軟件。
2.查看測序報告方法:
先閱Chromes軟件及其補丁使用方法文檔。
運行Chromes補丁等程序(否則軟件60天試用期過后,將只能打開圖譜,而不能進行其他任何操作).
3.特殊情況的說明:
下列特殊情況下只發E-mail不提供測序報告(不收費):
下列特殊情況下只發E-mail不提供測序報告(不收費):
應信號極弱甚至沒有反應信號。
信號極其雜亂,無法得到有用信息。
由于DNA結構上的原因,有時會出現反應中途無法進行之情況。如:GC rich;G、C cluster;Poly(A)、Poly(T)的連續結構等。此外,另一種情況為反應中途出現套峰現象。此種情況一般為由于DNA結構中的重復序列,造成測序用引物和模板之間有二個以上的結合點。以上為由于DNA結構原因造成了無法正常進行DNA測序,對這種情況我們須按照正常反應收費。出現以上情況后我們提倡從另一個方向進行測序。
如DNA本身或引物等的原因,測序反應從開始就無法進行,此時按反應失敗計算。反應失敗保證做第二次。如第二次同樣情況失敗。按標準收費的半價收費。